TECHNIQUE
AU FER COLLOIDAL DE HALE MODIFIEE
Principe
Méthode
basée sur l’affinité des ions Fe +++ pour les groupes acides. Le mécanisme
chimique exact de cette fixation est encore imprécis mais l’Hydroxyde
ferrique colloïdal, une fois fixé, est visualisé dans un second temps par le
Ferrocyanure de potassium (réaction du bleu de Prusse).
Mise
en évidence des mucopolysaccharides acides sulfatés.
Technique
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Coupes déparaffinées par 3 bains de Xylène
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Alcool 100, 95
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Eau courante – eau distillée
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Passer
les coupes rapidement dans une solution d’acide
acétique à 12%
FAIRE UN
TEMOIN POSITIF
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SANS RINCER placer les coupes dans sol. de travail
1 h
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Rincer
dans 4 bains d’acide acétique à 12%
3 mn chacun
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Placer
les coupes dans solution de Ferrocyanure
de K à 2% + HCI à 2%
(= HCI N/5)
en volume égal 20
mn
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Rincer eau courante – eau distillée
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Colorer
au Rouge
nucléaire
3 à 10 mn
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Rincer
eau courante – eau distillée
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Alcool 95, 100
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Xylène
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Montage à l’eukitt
On
peut également faire un témoin négatif qui suivra les étapes sauf le passage dans la
solution de travail.
Résultats
Réactifs
1)
Solution mère de fer colloïdal :
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Eau distillée
240 ml
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Chlorure
ferrique à 29% (n°51)
4,4 ml
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Ajouter le Chlorure ferrique lorsque l’eau est à ébullition. Attendre
que la solution vire au rouge sombre.
La solution
se conserve 2 mois maximum.
2)
Solution de travail :
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CH3COOH
(concentré)
5 ml
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Eau distillée stérile
15 ml
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Solution mère
120 ml
Ajuster au pH 1,1 à 1,3 : ceci est impératif avec CH3COOH concentré
3)
Rouge nucléaire :
-
Kernechtrot
(Prolabo 274101)
0,5 ml
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Sulfate
d’alumine
12,5 ml
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Eau distillée
250 ml
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Dissoudre en chauffant
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Ajouter un cristal de Thymol
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Conserver au réfrigérateur